Vollblut-schnelle Antigen-Entdeckungs-Ausrüstung, Haupttest-Ausrüstung des Antigen-150-250ul

Mit medizinischem Instrument IVD, zum Ausrüstung des Antikörper-zu tun der neutralisierenden schnellen Test-SARS-CoV-2

Neutralisierende Antikörper Fluerescent-Test-Ausrüstung u. neutralisierender Antikörper-schneller Test

Die pseudovirus-neutralisierende Antikörperprobe wurde durchgeführt, während vorher (5) beschrieb. Kurz wurden Vero-Zellen in 96 wohlen Platten gesät, um eine monomolekulare Schicht zu der Zeit der Infektion zu produzieren. Pretitrated-Mengen rVSV-SARS-Cov-2 [phCMV3-SARS-CoV-2 Spitze SARS-CoV-2-pseduotyped VSV-ΔG-GFP (grünes Leuchtstoffprotein) wurden erzeugt, indem man HEK293T-Zellen, ATCC CRL-3216 transfecting], wurden mit serienmäßig verdünntem menschlichem Plasma an 37°C 1 Stunde lang ausgebrütet, bevor man zusammenfließenden Vero-Zellmonomolekularen schichten (ATCC CCL-81) in 96 wohlen Platten hinzufügte. Zellen wurden 12 bis 16 Stunden lang an 37°C in 5% Co ausgebrütet2.Zellen wurden dann in 4% Paraformaldehyd geregelt, befleckt mit 1 μg/ml Hoechst und abgebildetes unter Verwendung eines Toners CellInsight CX5, um die Gesamtanzahl von den Zellen quantitativ zu bestimmen, die GFP ausdrücken. Infektion wurde zur durchschnittlichen Anzahl von den Zellen normalisiert, die mit rVSV-SARS-CoV-2 angesteckt wurden, ausbrütete mit normalem menschlichem Plasma. Das LOD wurde wie hergestellt <1:20 on="" the="" basis="" of="" plasma="" samples="" from="" a="" series="" of="" unexposed="" control="" subjects=""> 50Titer (der mittleren hemmenden Konzentration) wurden unter Verwendung der Regression des Ein-Standort-Sitzes LogIC50 in GraphPad-Prisma 8,0 berechnet.

Eine Fluoreszenz-ansässige Neutralisationsprobe des Hochdurchsatzes

Um den Abstand für Serodiagnose COVID-19 und Impfstoffbewertung auszufüllen, entwickelten wir eine Fluoreszenz-ansässige Probe der schnell und zuverlässig Neutralisation eines Reporters SARS-CoV-2 durch Antikörper von den geduldigen Exemplaren misst. Die Probe wurde auf einem Stall mNeonGreen aufgebaut (mNG) SARS-CoV-2, in dem das mNG Gen am ORF7 des Virengenoms ausgeführt wurde (Abb. 1a)10. Die komplette Reihenfolge von mNG SARS-CoV-2 wird im Ergänzungsabb. beschrieben 1. Zahl 1b stellt das Flussdiagramm der Reporterneutralisationsprobe in einem wohlen Format 96 dar. Das Probenprotokoll wird in den Ergänzungsmethoden einzeln aufgeführt. Kurz wurden geduldige Seren serienmäßig mit dem Reportervirus verdünnt und ausgebrütet. Nach Ausbrütung an 37°C für 1   h, wurden Zellen Vero CC-81 (vor-gesät in einer wohlen Platte 96) mit den Virus-/Serummischungen an einer Vielfältigkeit der Infektion (MOI) von 0,5 angesteckt. Bei 16   h Nachinfektion wurden die mNG-positiven Zellen unter Verwendung eines Hochinhaltsdarstellungslesers quantitativ bestimmt (Abb. 1b). Es sollte gemerkt werden, dass Zellen Vero CC-81, nicht Zellen Vero E6, für das mNG prüfen, um der genauen Quantifikation von Leuchtstoffzellen zu ermöglichen gewählt wurden. Sechzig Exemplare des Serums COVID-19 von Funktelegrafie-PCR-bestätigten Patienten und 60 von den Proben des Serums non-COVID-19 (archiviert vor Auftauchen COVID-19) wurden unter Verwendung des Reportervirus analysiert. Für irgendein COVID-19-positive Exemplare waren das nach-Viren-RT-PCR Positiv der Beispielsammlungstag verfügbar und werden in der Tabelle angezeigt Table1.1. Nach Reportervirusinfektion drehten die Zellen Grün in Ermangelung des Serums (Abb. 1c, Bodenplatte); demgegenüber verringerte Ausbrütung des Reportervirus mit geduldigem Serum COVID-19 die Anzahl von Leuchtstoffzellen (Spitzenplatte). Eine Ansprechen- auf die Dosiskurve wurde zwischen der Anzahl von Leuchtstoffzellen und der Falte der Serumverdünnung erreicht (Abb. 1d und Ergänzungsabb. 2), das die Bestimmung der Verdünnungsfalte zuließ, die 50% von Leuchtstoffzellen neutralisierte (NT50). Die Reporterprobe bestimmte schnell 120 Exemplare innerhalb 24   h: alle 60 Seren COVID-19 (Exemplare 1-60) zeigten positives NT50von 35 bis 5711 und von allen 60 Seren non-COVID-19 (Exemplare 61-120) zeigte negatives NT50von <20>1).

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